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分 離 純 化

發(fā)布時間: 2022-10-25  點擊次數(shù): 1709次

分 離 純 化

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含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物(mixed culture)。如果在一個菌落中所有細(xì)胞均來自于一個親代細(xì)胞,那么這個菌落稱為純培養(yǎng)(pureculture)。在進行菌種鑒定時,所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化,方法有許多種。


1、傾注平板法

首先把微生物懸液通過一系列稀釋,取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50°左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合,然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中,待凝固之后,把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細(xì)胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落,取單個菌落制成懸液,重復(fù)上述步驟數(shù)次,便可得到純培養(yǎng)物。




2、涂布平板法

首先把微生物懸液通過適當(dāng)?shù)南♂?,取一定量的稀釋液放在無菌的已經(jīng)凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上,然后用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上,經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個菌落。


3、平板劃線法

簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進行劃線。劃線的方法很多,常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動時,接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋,最后在所劃的線上分散著單個細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng),每一個細(xì)胞長成一個菌落。


4、富集培養(yǎng)法

富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡單。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長,在這些條件下,所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭,在生長能力方面遠遠超過其他微生物。如果要分離一些專性寄生菌,就必須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群體中,使其大量生長。通過多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。

5、厭氧法

在實驗室中,為了分離某些厭氧菌,可以利用裝有原培養(yǎng)基的試管作為培養(yǎng)容器,把這支試管放在沸水浴中加熱數(shù)分鐘,以便逐出培養(yǎng)基中的溶解氧。然后快速冷卻,并進行接種。接種后,加入無菌的石蠟于培養(yǎng)基表面,使培養(yǎng)基與空氣隔絕。另一種方法是,在接種后,利用N2或CO2取代培養(yǎng)基中的氣體,然后在火焰上把試管口密封。有時為了更有效地分離某些厭氧菌,可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上,然后再把培養(yǎng)皿放在*密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。

6、單細(xì)胞(或單孢子)分離法

是采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。較大的微生物,可采用毛細(xì)管提取單個個體。個體相對較小的微生物,需采用顯微操作儀,在顯微鏡下用毛細(xì)管或顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個微生物細(xì)胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。單細(xì)胞分離法對操作技術(shù)有比較高的要求。


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